Metagenomics
Metagenomika: sekwencjonowanie regionów zmiennych mikroorganizmów (16S rDNA - bakterie, ITS- grzyby)
Informacje ogólne:
Metagenomika stanowi metodę analizy genomu złożonego z ogółu mikroorganizmów zasiedlających dany mikrobiom (np. glebę). Poprzez sekwencjonowanie fragmentów zmiennych w genomach możliwe jest zrozumienie różnorodności genetycznej, składu populacyjnego oraz wpływu ekologicznego mikroorganizmów badanego środowiska. Technika sekwencjonowania regionów hiperzmiennych pozwala na wgląd w genetyczną różnorodność bez konieczności prowadzenia hodowli komórkowych. Informacje uzyskane z sekwencjonowania, interpretowane w aspekcie mikrobiomu i utrzymania jego homeostazy, mogą stanowić cenną wiedzę zarówno w ochronie środowiska, jak i szeroko pojętym przemyśle (w tym przemyśle farmaceutycznym).
Zalety wykorzystania NGS w sekwencjonowaniu regionów hiperzmiennych mikroorganizmów:
- duża wydajność metody i niskie koszty badania
- skupienie analizy wyłącznie na regionach hiperzmiennych mikroorganizmów
- ułatwienie analizy w oparciu o istniejące bazy referencyjne danych genetycznych
- różne metody analizy wyników (wskaźniki różnorodności, skład populacyjny, drzewa filogenetyczne)
Analiza bioinformatyczna:
Podstawowa
Rozszerzona
-
analiza różnorodności (alpha- i beta- diversity)
-
analiza głównych składowych (PCA) i analiza głównych współrzędnych (PCoA)
-
konstrukcja drzew filogenetycznych
-
porównanie grup próbek we wskazanym przez Klienta schemacie
-
analiza statystyczna
-
graficzne przedstawienie wyników (wykresy słupowe, kołowe oraz heat tree)
|
Parametry techniczne- wymagania dotyczące próbek:
Metabarkoding oparty o wybrany region hiperzmienny np. V3-V4 16S, ITS1:
-
Stan próbki: wyizolowane DNA metagenomowe
-
Ilość próbki: ≥ 50 ng
-
Stężenie próbki: ≥ 5 ng/μl
-
Objętość próbki: ≥ 20 μl
-
Jakość próbki: próbka niezdegradowana
-
Czystość próbki: OD260/280 = 1,8 - 2,0
Metabarkoding oparty o pełnej długości amplikony 16S, ITS1-5.8S-ITS2 lub 18S:
-
Stan próbki: wyizolowane DNA metagenomowe
-
Ilość próbki: ≥ 300 ng
-
Stężenie próbki: ≥ 15 ng/μl
-
Objętość próbki: ≥ 20 μl
-
Jakość próbki: próbka niezdegradowana
-
Czystość próbki: OD260/280 = 1,8 - 2,0
|