Small RNA Sequencing
Sekwencjonowanie małych RNA
Informacje ogólne:
Sekwencjonowanie małych RNA jest najbardziej wiarygodną metodą identyfikacji i profilowania małych RNA, które obejmują microRNA, siRNA, piRNA i rRNA. MicroRNA pełnią kluczową rolę we wzroście, rozwoju, różnicowaniu i śmierci komórek, dlatego są interesującym tematem badawczym na całym świecie. Sekwencjonowanie microRNA pozwala na wnikliwą obserwację procesów molekularnych a co za tym idzie zrozumienie mechanizmów powstawania choroby. Sekwencjonowanie małych RNA z biegiem lat staje się coraz bardziej popularną techniką która umożliwia opracowywanie nowych leków oraz biomarkerów molekularnych.
Analiza bioinformatyczna:
- przycinanie i filtrowanie odczytów przygotowanie plików wynikowych wyników w formacie .fastq i .fasta
- analiza długości małych RNA
- identyfikacja rRNA, tRNA, snRNA, snoRNA
- porównanie małych RNA ze znanymi miRNA w bazie miRBase
- rozkład genów kodujących małe RNA w badanym genomie
- analiza wspólnych i specyficznych sekwencji pomiędzy parami próbek
- analiza wzorca ekspresji znanych miRNA
- przewidywanie nowych miRNA i ich struktur drugorzędowych
- ustalenie różnic ekspresji poszczególnych miRNA pomiędzy parami próbek (np. kontrola vs próbka)
- dopasowanie genów docelowych dla cząsteczek miRNA
- analiza funkcjonalna genów docelowych - ontologia genów (GO), ścieżki KEGG
Parametry techniczne - wymagania dotyczące próbek:- Stan: całkowite RNA oczyszczone enzymem DNazą
- Ilość: ≥ 2 μg
- Stężenie: 50 ng/μl
- Objętość: ≥ 20 μl
- Czystość: brak kontaminacji białkami, OD260/280 ≥ 2.0, OD260/230 ≥ 2.0
- Jakość: próbka niezdegradowana, 28S:18S ≥ 1.0, RIN ≥ 8.0 (wg Agilent Bioanalyzer 2100)
|